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Pierce™ Rapid Gold BCA 蛋白測定試劑盒

Pierce Rapid Gold BCA 蛋白測定試劑盒是一種快速、雙組分、高精度、去污劑兼容的測定法，經(jīng)優(yōu)化用于測定總蛋白質(zhì)濃度。其采用與傳統(tǒng) Pierce BCA 蛋白測定法相同的銅螯合技術(shù)，具有可比的準(zhǔn)確度，但僅在室溫下孵育5分鐘并在 480 nm 處測量。使用這種改良方法，無需等待或?qū)悠繁┞队诟邷匾钥焖佾@得結(jié)果。

與所有可用的 BCA 蛋白測定法具有可比性?

Rapid Gold BCA 蛋白測定試劑盒的特點(diǎn)包括：
•吸光度 — 比色法，480 nm 處具有吸光度
•均勻性 — 蛋白間差異與傳統(tǒng) BCA 蛋白測定法相似且小于染料結(jié)合蛋白測定法 (Bradford)
•兼容性 — 不受大多數(shù)離子和非離子去污劑典型濃度的影響
•測定時間 — 5分鐘室溫反應(yīng)
•測定范圍 — BSA 的線性工作范圍為 20-2000 µg/mL

傳統(tǒng) BCA 蛋白測定法是廣泛使用和可接受的蛋白測定法，因其高度準(zhǔn)確的蛋白濃度測定和與蛋白研究中遇到的大多數(shù)樣品類型兼容而受到信賴。然而，使用這種傳統(tǒng)方案處理樣品時，必須在 37°C 下加熱反應(yīng)30分鐘或室溫下孵育兩小時。快速 Gold BCA 蛋白定量試劑盒既保留了經(jīng)典 BCA 的關(guān)鍵特點(diǎn)，又縮短了室溫孵育時間，孵育要求（時間和溫度）與染料結(jié)合法相同。快速Gold BCA 蛋白定量試劑盒可用于評估全細(xì)胞裂解物、親和純化柱分離組分的產(chǎn)率，以及監(jiān)測工業(yè)應(yīng)用中的蛋白質(zhì)污染。與大多數(shù)染料結(jié)合法相比并且與傳統(tǒng) BCA 測定法相似，Rapid Gold BCA 測定法受蛋白質(zhì)組成差異的影響更小，蛋白間差異較小。

Rapid Gold BCA 蛋白測定法如何檢測蛋白
Rapid Gold BCA 蛋白測定法采用與傳統(tǒng) BCA 蛋白測定法相同的銅還原法和獨(dú)te的銅螯合物。該測定法將在堿性介質(zhì)中通過蛋白將 Cu2+ 還原為 Cu1+ 與通過專有螯合物高靈敏度和選擇性的比色檢測亞銅陽離子 (Cu1+) 相結(jié)合。步是銅與堿性環(huán)境中的蛋白質(zhì)螯合，形成淺綠色復(fù)合物，這一過程被稱為雙縮脲反應(yīng)。在該反應(yīng)（稱為雙縮脲反應(yīng)）中，含有三個或更多氨基酸殘基的肽在含酒石酸鈉鉀的堿性環(huán)境中與銅離子形成有色螯合復(fù)合物。

在顯色反應(yīng)的第二步中，Rapid Gold BCA 螯合物與步形成的還原型（亞銅）陽離子反應(yīng)。兩分子 BCA 與一個亞銅離子螯合，產(chǎn)生深金橙色反應(yīng)產(chǎn)物。BCA/銅復(fù)合物是水溶性的，在 480 nm 處具有強(qiáng)線性吸光度，吸光度隨蛋白濃度增加而升高。該復(fù)合物的靈敏度（檢測下限）大約是個反應(yīng)中淡綠色的100倍。

顯色反應(yīng)受到蛋白氨基酸序列中四個氨基酸殘基（半胱an酸、胱an酸、酪an酸和色an酸）的強(qiáng)烈影響。但是，與考馬斯染料結(jié)合法不同，一般的肽基質(zhì)也會影響顯色，BCA 法有助于將蛋白質(zhì)組成差異造成的變異性降至zui低。

快速 Gold BCA 蛋白測定的兼容性
一些已知可干擾快速 Gold BCA 蛋白測定的物質(zhì)包括潛在還原劑、螯合劑以及強(qiáng)酸或強(qiáng)堿。由于這些物質(zhì)在微量濃度下就能夠干擾蛋白質(zhì)濃度估算，因此，應(yīng)避免使用以下物質(zhì)作為樣品緩沖液的組分：
•抗壞血酸
• EGTA
• 鐵
• 不純蔗糖
• 兒茶酚胺
• 不純甘油
• 脂質(zhì)
• 色an酸
• 肌酐
• 過氧化氫
• 密二糖
• 酪an酸
• 半胱an酸
• 酰肼類
• 酚紅
• 尿酸

Pierce™ Rapid Gold BCA 蛋白測定試劑盒